人工授精(Artificial Insemination, AI)是指在人工控制条件下,将经过处理的精液经过必要的操作送入雌性生殖道内使其受精的技术。
一、采精
(一)雄性动物的准备工作
1.布置生活环境:舒适、安静、不受干扰。室内温度一般控制在20~25℃,湿度60~80%。
2. 控制饮食:营养均衡、不过饱、维生素摄入充分。特别是禁食12小时以上,口腔干净、舌头微湿,不吃糖浆、胡萝卜素等有色物质。
3. 爱护和训练:通过善后、抚摸、按摩,增进动物亲和情感,以协助顺利完成采精操作。
(二)采精器材准备
精液容器、采精器(包括填充杆和采精架)、暖水器等。
(三)采精操作
1.送睾丸:将雄性动物安置在采精操作面前或侧面。一只手按着小腹,另一只手用近心端慢慢推移,使睾丸从股骨窝下进入腹膜内。在睾丸旁边侧方用双指轻压,睾丸在压迫中暂停,有助于使肌肉松弛并处于好的采精位置。
2.填充与采集:预先将填充杆放入暖水桶中加温,使其和雄性动物的体温相当。将填充杆残留的液体清洗干净,然后插入采精器内,置于温暖的暖水中,以便填充时不烫伤动物的生殖器官。取来暖水填充杆在喷头的小孔中透过微压,使填充杆内互贯的塞子露出雄性动物器官幅度内的长度,迅速合上塞子,使填充杆紧紧贴着动物的生殖器官。填充完成后,移去填充杆,置于精液容器处。
3.记录和处理:标注精液容器上的详细编号、日期、采精时间、填充杆号等。完成采集后尽快对精液进行初步分离、检验和冷藏,得到较好的精子保护和使用时间的长短。
二、精液处理
人精液一般用液体氮冷冻保存。液氮贮存的疗效较差,并且氮气在贮存液中徐徐溶解,且带入大量细菌,因此不好存储。主要的液氮贮存方法是使用一些冷冻保护剂,如甘露醇、1,2-丙二醇、分子筛和明胶等,可以保留可用的精子5-10年,并且可保持较高的精子活力。
三、人工授精
(一)人工授精技术
1.暂时性无性
采用转百叶窗、垫高等方法使雌性动物腰部下垂,将5~10ml 液化后的精液注入雌性动物子宫内。
2.短时接触性人工授精
将液化后的精液注入到一人工授精杯中,加入适量的CZB培养液,与卵子接触时间在10-20 min 左右,然后将卵子取出移植回雌性动物生殖道进行体内孕育。
3.体外受精(IVF)
将卵子、精子在培养皿中体外受精后,再移植回雌性动物生殖道内,进行孕育过程。
(二)人工授精操作
1.女性准备:采用顺势卧位,显露外阴部,用清洁肥皂洗外阴部后,用消毒棉球擦拭,拭去交感神经支配的分泌物。然后捏开阴道口,用无菌的侧切器或直切器将宫颈从低位往上挺直,排除宫颈道中的阻力,预备输送精液。
2.男性准备:洗手、消毒。尽量避免情绪波动和精神紧张,静坐或取左侧卧位。
3.精液准备:将精液取出暖器中,用柔软的毛巾擦去包括填充杆、采精器上某些残留物。取出干净的松骨移液器(或人工授精器),并用药棉涂上润滑剂。
4. 道具调配:由医生取出阴道扩张器,在涂上消毒液后,较容易插入阴道内,并做适当的调节。
5. 贯通入子宫:由医生抓住气囊上的皮胶,将精液输送管插入宫颈口,通过气囊引导计数。输送精液时需要确保准确、稳定、无异物污染等标准。
6. 人工授精:轻插管内圆锥体并打开阀门,缓慢推送精液,以保证稳定、匀称和适当压力的传送。
7. 完成程序:取出输送管并熔合阀门,用通气宝抽出物管内的气体,以防受精后精液逆流。尽快退出阴道扩张器,在阴道口用药棉球轻轻拭去精液,以免污染门户。最后,修正肉损、缝合伤口、做好药物护理。
通过上述流程可完成人工授精技术的完整过程。